효소처리스테비아

출처Stevioside is a naturally occurring sweetener (～200 times sweeter than sucrose) extracted from a South American plant, Stevia rebaudiana Bertoni. The dried leaves, the water extract of leaves, and the refined chemical ingredients, eg, and Rebaudioside A (～300 times sweeter than sucrose), can all be used as sweetening agents. These are collectively referred to as stevia. Discovered in Paraguay and Brazil, the plant was identified in the early 1970s as a plant of high economical value and transported to Japan for cultivation, where the commercialization of stevia leaves extract as a natural sweetener became a success. Today Stevia plant is cultivated primarily in China.

역사Because no food additive petition has been presented to the FDA, stevioside and related materials cannot be used in the United States as food ingredients. An import alert against stevia was issued by the FDA in 1991. In 1995, however, the FDA revised this import alert to allow the importation and use of stevia as a dietary supplement, but not as a sweetener or an ingredient for foods. In 2004, JECFA (Joint Expert Committee of Food Additives) issued a preliminary ADI (Allowed Daily Intake) of 2-mg/kg body weight (based on steviol) for stevia extract. This action may impact favorably on worldwide regulatory approval. As consumer’s demand on naturally sweetened products increases, interest in Stevia, and naturally occurring potent sweeteners in general, is expected to grow. A comprehensive review of stevia is available [Kinghorn, 2002].

순도시험(1) 액성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 4.5～7.0이어야 한다. (2) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.3ppm 이하이어야 한다. (3) 납 : 이 품목 약 10g을 정밀히 달아 백금제 또는 석영제 도가니에 넣고 황산 소량을 가하여 적신 다음 서서히 가열하여 가능한 한 저온에서 예비회화한 후, 다시 황산 1mL를 가하고 천천히 가열하여 450～550℃에서 회화될 때까지 강열한다. 회화가 끝나면 잔류물에 소량의 질산(1→150)을 가하여 녹이고, 다시 질산(1→150)을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다. (4) 잔류용매 : 이 품목 2g을 정밀히 달아 300mL 환저플라스크에 넣고, 물 200mL를 가해 주고, 비등석 및 실리콘수지 1mL를 넣고 잘 섞어준다. 이에 증류장치를 장착한 다음 100mL용량의 플라스크 수기에 내부표준용액 4mL를 정확히 취하여 가해 주고 기포가 넘치지 않도록 조정하면서 1분에 2～3mL의 증류 속도로 유액이 약 90mL가 될 때까지 증류한 다음 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 내부표준용액은 tert-부틸알콜(1→1,000)을 사용한다. 따로, 메탄올 0.5g을 정밀히 달아 물을 가하여 500mL로 하고, 다시 이액 2mL 및 내부표준용액 4mL를 취한 다음 물을 가하여 100mL로 한 액을 혼합표준용액으로 한다. 시험용액 및 혼합표준용액을 각각 2μL씩 취하여 다음의 조작조건으로 가스크로마토그래피에 주입한다. 이어서 시험용액 및 혼합표준용액 중의 tert-부틸알콜피크면적에 대한 메탄올의 피크면적비 QT 및 QS을 각각 구하여 다음 계산식에 따라 메탄올의 양을 구할 때, 그 양은 200ppm 이하이어야 한다.QT : 시험용액의 tert-부틸알콜에 대한 메탄올의 피크면적비QS : 혼합표준용액의 tert-부틸알콜에 대한 메탄올의 피크면적비 조작조건 칼 럼 : PLOT Q 또는 이와 동등한 것 검 출 기 : 수소염이온화검출기(FID) 주입구온도 : 200℃ 칼럼온도 : 120℃ 검출기온도 : 300℃ 캐리어가스 : 질소 또는 헬륨

확인시험이 품목 0.5g을 물 100mL에 녹인 액을 시험용액으로 하고, 정량용 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A를 각각 5mg씩을 취하여 물 10mL에 녹인 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 정량법의 조작조건에 따라 액체크로마토그래피를 행할 때, 시험용액의 주피크의 유지시간은 표준용액의 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A의 양쪽 피크의 유지시간 또는 한쪽 피크의 유지시간과 일치한다.

정량법이 품목을 105℃에서 2시간 건조한 다음 약 50～100mg을 정밀히 달아 물:아세토니트릴(7:3) 혼액에 용해하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A 표준품을 105℃에서 2시간 건조한 다음 각각 50mg을 정밀히 달아 물:아세토니트릴 - 4 - (7:3) 혼액에 용해하여 50mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 각각 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피에 주입 하여 총 스테비올배당체의 함량을 구한다. 시험용액의 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 A, 리바우디오사이드 B, 리바우디오 사이드 C, 리바우디오사이드 D, 리바우디오사이드 F, 스테비올비오 사이드, 스테비오사이드의 피크 머무름 시간과 혼합표준용액의 상기 9가지 성분의 피크 머무름 시간을 비교하여 확인한다. 상기 9가지 성분의 검출순서는 리바우디오사이드 D, 리바우디오사이드 A, 스테비오사이드, 리바우디오사이드 F, 리바우디오사이드 C, 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 B, 스테비올비오사이드 순이다. 정량은 시험용액의 9가지 성분의 피크면적을 각각 구하고 다음 계산식에 따라 리바우디오 사이드 A를 제외한 8가지 성분의 함량과 리바우디오사이드 A의 함량을 구한 다음 그 합계를 스테비올배당체의 함량으로 한다.X : 각각의 스테비올배당체WS : 표준용액의 스테비오사이드 함량(mg)WR : 표준용액의 리바우디오사이드 A 함량(mg)W : 시험용액의 검체 함량(mg)AS : 표준용액의 스테비오사이드 피크면적AR : 표준용액의 리바우디오사이드 A 피크면적AX : 시험용액 중 X의 피크면적fX : 스테비오사이드에 대한 X의 분자량 비율 (스테비오사이드 1.00, 리바우디오사이드 A 1.20, 리바우디오사이드 B 1.00, 리바우디오사이드 C 1.18, 리바우디오사이드 D 1.40, 리바우디오사이드 F 1.16, 둘코사이드 A 0.98, 루부소사이드 0.80, 스테비올비오사이드 0.80) 조작조건 검출기 : UV 210nm 칼럼 : Capcell pak C18 MG Ⅱ(4.6mm×250mm, 5μm) 또는 이와 동등한 것 칼럼온도 : 40℃ 이동상 : 아세토니트릴 : 10mM 인산완충액(pH 2.6) (32:68) 유속 : 1.0mL/min 주입량 : 10μL 시 액 10mM 인산완충액(pH 2.6) 인산일나트륨 1.1998g을 물에 녹여 1,000mL로 한다. 인산(1→10)을 가하여 pH 2.6으로 조정한다.

정의이 품목은 스테비아(Stevia rebaudiana Bertoni)의 건조잎을 열수로 추출하여 얻어진 수용성추출물을 흡착수지로 처리하여 농축한 다음, 메탄올 또는 에탄올을 사용하여 재결정 등의 정제를 거친 후 건조하여 얻어지는 것으로서 주성분은 스테비올배당체(steviol glycoside)이다.